欢迎访问盐城市飞龙油脂有限公司官方网站!主要生产销售的产品包括:聚合甘油、动植物油酸、脱模油、合脂油等。

盐城市飞龙油脂有限公司主要生产销售的产品包括:聚合甘油、动植物油酸、脱模油、合脂油等

聚合甘油新闻您的位置:首页聚合甘油新闻

应用易错APCR定向进化聚合甘油脱氢酶

经过连续易错聚合酶链式反应(Error-Prone PCR)向克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)聚合甘油脱氢酶基因中引进骤变,并构建骤变文库。依据骤变体催化番红O显色的特性,选用琼脂平板法和96微孔板法相结合的高通量挑选方法,成功获得骤变体gldA-74,其酶生机是亲本重组酶的2.73倍。经过软件对骤变体gldA-74酶基因和亲本重组酶基因进行剖析比照,发现骤变体gldA-74酶基因发生了一处点骤变(A964T),该骤变使一处氨基酸被替代。将亲本重组酶和进化酶的高效表达产物经Ni柱纯化后,酶学性质的测定结果表明,聚合甘油的Km值由0.58 mmol•L^(-1)升高至0.63 mmol•L^(-1),而NAD的Km值由0.74 mmol•L^(-1)升高至0.77mmol•L^(-1),并且酶的最适pH值由本来的11.5升高至12.5,而最适温度由65℃降至55℃。